全自动样品冷冻研磨仪对拟南芥或水稻穗进行研磨破碎

实验目的

对拟南芥或水稻穗进行研磨破碎，进而提取其DNA。

实验原理

通过研磨珠的撞击，充分拟南芥或水稻穗细胞，使其内容物流出，进而提取目标成分。

实验材料和器具

样品：拟南芥或水稻穗

仪器：全自动样品冷冻研磨仪（上海净信，Tissuelyser-48）

耗材：离心管，不锈钢研磨珠（上海净信）

试剂：TPS溶液（100mM Tris-Cl (pH 8.0)，10mM EDTA (pH 8.0)，1M KCl）

实验步骤

1.取一片拟南芥的叶片（或10d左右的小苗），加入两毫升EP管中。

2.加钢珠1颗

3.加TPS提取液0.02ml

4.设置研磨仪参数10单位频振，1min。（水稻嫩叶设置45S，12单位频振；老叶设置70S，12单位频振）

5.离心（4000rpm，1min），将打碎的组织和提取液一起转移至96孔板中。

6.96孔板加盖子，75°加热15min

7.大离心机高转速10min

8.取上清，转入另一块96孔板，加入等体积的异丙醇。

9.加盖子，混匀

10.4°下10min或-20°下10min，如材料很多此步骤可省略。

11.高转速离心10min。

12.弃上清，加入0.04ml 70%乙醇。

13.高转速离心10min

14.弃去乙醇，37°放置20-30min烘干

15.加入0.016ml水，65°放置10min

16.离心除去气泡，之后可以直接用于PCR实验。

实验注意事项

1.-20°下该方法的DNA可以保存4个月以上，4°大致可以放2-3周。