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全自动样品冷冻研磨仪破碎大肠杆菌的细胞壁的实验方法

发布时间:2017/05/31 点击量:

实验目的

对大肠杆菌进行破壁,提取其蛋白质。

实验原理

通过研磨珠的撞击,破碎大肠杆菌的细胞壁,使其内容物流出,进而提取其蛋白质。

实验材料和器具

样品:大肠杆菌

仪器:全自动样品冷冻研磨仪(上海净信,JXFSTPRP-96)

耗材:离心管,研磨珠(上海净信,1号)

实验步骤

1.IPTG诱导表达的大肠杆菌细胞经离心后弃沉淀,在加入2体积 PBS重悬细胞团块后,以移液枪将其加入含有1号玻璃研磨珠的离心管中;

2.将上述离心管放入多样品组织研磨机中,在13单位振频条件下震荡90s;

3.取出离心管在4o c离心,保存上清液S1,以备上述检测;

4.向每个1号玻璃珠离心管中加入0.2ml 8M 尿素溶液后,再放入多样品组织研磨机中,在13单位振频条件下震荡90s,可见混浊液变清;

5.离心后收集上清液S2与S1(各0.002ml)在SDS-Page上电泳检测。

实验结果

泳道实验

 

图注:泳道3:marker

泳道2:0号对照

泳道1:含8M尿素上清

泳道0:bingding buffer 上清

泳道      0        1       2      3

本蛋白形成包涵体,在使用此研磨机后进行上样电泳。图谱清晰,说明本研磨机适用于含包涵体菌体的破碎。

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